在心血管藥理研究中的應(yīng)用,，隨著膜片鉗技術(shù)在心血管方面的廣泛應(yīng)用,，對(duì)血管疾病和藥物作用的認(rèn)識(shí)不僅得到了不斷更新,，而且在其病因?qū)W與藥理學(xué)方面還形成了許多新的觀點(diǎn),。正如諾貝爾基金會(huì)在頒獎(jiǎng)時(shí)所說(shuō)：“Neher和Sadmann的貢獻(xiàn)有利于了解不同疾病機(jī)理，為研制新的更為的藥物開辟了道路”,。目前在離子通道高通量篩選中主要是進(jìn)行樣品量大,、篩選速度占優(yōu)勢(shì)、信息量要求不太高的初級(jí)篩選,。近幾年,，分別形成了以膜片鉗和熒光探針為基礎(chǔ)的兩大主流技術(shù)市場(chǎng)。將電生理研究信息量大,、靈敏度高等特點(diǎn)與自動(dòng)化,、微量化技術(shù)相結(jié)合，產(chǎn)生了自動(dòng)化膜片鉗等一些新技術(shù),。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*52小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.一些學(xué)者建立了組織切片膜片鉗技術(shù)（Slicepatch）,，就能在哺乳動(dòng)物腦片制備上做全細(xì)胞記錄。日本全細(xì)胞膜片鉗系統(tǒng)

膜片鉗技術(shù)的發(fā)展∶全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)（Automated patch clamp technique）的出現(xiàn)標(biāo)志著膜片鉗技術(shù)已經(jīng)發(fā)展到了一個(gè)嶄新階段,，從這個(gè)意義上說(shuō),，前面所講的膜片鉗技術(shù)我們稱之為傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)（ Traditional patch clamp technique），傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)每次只能記錄一個(gè)細(xì)胞（或一對(duì)細(xì)胞）,，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員來(lái)說(shuō)是一項(xiàng)耗時(shí)耗力的工作,，不適合在藥物開發(fā)初期和中期進(jìn)行大量化合物的篩選，也不適合需要記錄火量細(xì)胞的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究,。全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)的出現(xiàn)在很大程度上解決了這些問(wèn)題,，它不僅通量高，一次能記錄幾個(gè)甚至幾十個(gè)細(xì)胞,，而且從找細(xì)胞,、形成封接、破膜等整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化,，免除了這些操作的復(fù)雜與困難,。這兩個(gè)優(yōu)點(diǎn)使得膜片鉗技術(shù)的工作效率提高了!全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)采用的標(biāo)本必須是懸浮細(xì)胞，像腦片這類標(biāo)本無(wú)法采用,。此外,，全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)只能進(jìn)行全細(xì)胞記錄模式、穿孔膜片鉗記錄模式以及細(xì)胞貼附式單通道記錄模式,，而不能進(jìn)行其他模式的記錄,。雙分子層膜片鉗細(xì)胞功能特性這是一種以記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。

膜片鉗技術(shù)的建立1.拋光及填充好玻璃管微電極,，并將它固定在電極夾持器中,。2.通過(guò)一個(gè)與電極夾持器連接的導(dǎo)管給微電極內(nèi)一個(gè)壓力，一直到電極浸入記錄槽溶液中,。3.當(dāng)電極浸沒(méi)在溶液中時(shí)給電極一個(gè)測(cè)定脈沖（命令電壓,，如5-10ms,，10mV）讀出電流，按照歐姆定律計(jì)算電阻,。4.通過(guò)膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前列的連接電位（junctionpotentials）調(diào)至零位,，這種電位差是由于電極內(nèi)填充溶液與浸浴液不同離子成分的遷移造成的。5.用微操縱器將微電極前列在直視下靠近要記錄的細(xì)胞表面,，并觀察電流的變化,，直至阻抗達(dá)到1GΩ以上形成"干兆封接"6.調(diào)整靜息膜電位到期望的鉗位電壓的水平，使放大器從"搜尋"轉(zhuǎn)到"電壓鉗"時(shí)細(xì)胞不至于鉗位到零,。

1980年,，Sigworth、Hamill,、Neher等在記錄電極內(nèi)施加負(fù)壓吸引,，得到了10~100GΩ的高阻封接（gigaseal），降低記錄噪聲,，實(shí)現(xiàn)了單根電極既鉗制膜電位又記錄單通道電流,。獲1991年Nobel獎(jiǎng)。1955年,，Hodgkin和Keens應(yīng)用電壓鉗（Voltageclap）在研究神經(jīng)軸突膜對(duì)鉀離子通透性時(shí)發(fā)現(xiàn)放射性鉀跨軸突膜的運(yùn)動(dòng)很像是通過(guò)許多狹窄空洞的運(yùn)動(dòng),，并提出了"通道"的概念。1963年,，描述電壓門控動(dòng)力學(xué)的Hodgkin-Hx上模型（簡(jiǎn)稱H-H模型）榮獲譜貝爾醫(yī)學(xué)/生理學(xué)獎(jiǎng),。1976年，Neher和Sakmann建立膜片鉗（Patchclamp）按術(shù),。1983年10月,，《Single-ChannelRecording》一書問(wèn)世，奠定了膜片鉗技術(shù)的里程碑,。1991年,，Neher和Sakmann的膜片鋪技術(shù)榮獲諾貝爾醫(yī)學(xué)/生理學(xué)獎(jiǎng)。膜電位Vm由高輸入阻抗的電壓跟隨器所測(cè)量,。

離子通道是一種特殊的膜蛋白,，它橫跨整個(gè)膜結(jié)構(gòu)，是細(xì)胞內(nèi)部與部外聯(lián)系的橋梁和細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交換的孔道,，當(dāng)通道開放時(shí),。細(xì)胞內(nèi)外的一些無(wú)機(jī)離子如Na，kCa等帶電離子可經(jīng)通道順濃度梯度或電位梯度進(jìn)行跨膜擴(kuò)散,，從而形成這些帶電離子在膜內(nèi)外的不同分布態(tài)勢(shì),，這種態(tài)勢(shì)和在不同狀態(tài)下的動(dòng)態(tài)變化是可興奮細(xì)胞靜息電位和動(dòng)作電的基礎(chǔ)。這些無(wú)機(jī)離子通過(guò)離子通道的進(jìn)圍所產(chǎn)生的電活動(dòng)是生命活動(dòng)的基礎(chǔ),，只有在此基礎(chǔ)上才可能有腺體分泌,、肌肉收縮、基因表達(dá),、新陳代謝等生命活動(dòng),。離子通道結(jié)構(gòu)和功能障礙決定了許多疾病的發(fā)生和發(fā)展。因此,，了解離子通道的結(jié)構(gòu),、功能以及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系對(duì)于從分子水平深入探討某些疾病的病理生理機(jī)制、發(fā)現(xiàn)特異藥物或措施等均具有十分重要的理論和實(shí)際意義,。膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個(gè)離子通道,、面積為幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜通過(guò)負(fù)壓吸引封接起來(lái)。全自動(dòng)膜片鉗

早期的研究多使用雙電極電壓鉗技術(shù)作細(xì)胞內(nèi)電活動(dòng)的記錄,。日本全細(xì)胞膜片鉗系統(tǒng)

膜片鉗技術(shù)發(fā)展至今,，已經(jīng)成為現(xiàn)代細(xì)胞電生理的常規(guī)方法，它不僅可以作為基礎(chǔ)生物醫(yī)學(xué)研究的工具,，而且直接或間接為臨床醫(yī)學(xué)研究服務(wù),。目前膜片鉗技術(shù)廣泛應(yīng)用于神經(jīng)（腦）科學(xué)、心血管科學(xué),、藥理學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、病理生理學(xué),、中醫(yī)藥學(xué),、植物細(xì)胞生理學(xué)、運(yùn)動(dòng)生理等多學(xué)科領(lǐng)域研究,。隨著全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)（Automaticpatchclamptechnology）的出現(xiàn),，膜片鉗技術(shù)因其具有的自動(dòng)化、高通量特性,，在藥物研發(fā),、藥物篩選中顯示了強(qiáng)勁的生命力。日本全細(xì)胞膜片鉗系統(tǒng)

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